首页 期刊 中国兽药 猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 【正文】

猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化

作者:裴仉福; 陈瑞爱; 唐秀英; 朱文冠; 唐满华; 李琳; 程含波; 温纳相 广东大华农动物保健品有限公司; 广东新兴527439; 广东温氏食品集团有限公司; 广东新兴527439
基因表达   蛋白纯化  

摘要:以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5a,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c—IL18和pET32c—IL18。将pET41c—IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1mmol/LIPTG37℃诱导表达。SDS-PAGE及Western—blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8mol/L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。

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