首页 期刊 中华医学遗传学 用SYBR-GreenⅠ实时荧光PER结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血 【正文】

用SYBR-GreenⅠ实时荧光PER结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血

作者:闫梅; 王立荣; 王战勇; 周艳; 梁燕; 肖白; 刘敬忠 首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心; 北京100020; 中国医学科学院基础医学研究所
实时聚合酶链反应   1   融解曲线  

摘要:目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Greenl进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1,SYBR-PCR),检测左缺(-α^4.2)、右缺(-α^3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation calve,DC)和Tm(melting temperature)值分析。PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α^4.2,-α^3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α^4.2和-α^3.7的PCR产物长度分别为1.65kb、1.9kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×10^2个拷贝、4.3×10^2个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Greenl实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α^4.2、-α^3.7、αα(包括α^Tα)及--^SEA4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用。

注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社

学术咨询 免费咨询 杂志订阅