摘要：目的构建能在肝癌细胞系SMMC-7721中稳定表达的高效率 DNMT1的RNA干扰载体.方法合成特异性干扰 DNMT1的小分子干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)分子,并与pSUPER-GFP载体连接.脂质体转染SMMC-7721细胞,并以G418筛选稳定表达细胞系.应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹方法对细胞系中 DNMT1的RNA表达水平和蛋白表达水平进行了分析.应用甲基化聚合酶链反应方法分析该细胞系中甲基化的基因E-钙粘着蛋白的甲基化状态.结果转染 DNMT1沉默载体的SMMC-7721细胞中 DNMT1的mRNA表达量为对照载体pSUPER转染SMMC-7721细胞的43%,而前者中DNMT1蛋白表达水平小于后者的10%. DNMT1的siRNA沉默效率大于90%,所构建的 DNMT1的siRNA有较高的沉默效率. DNMT1的表达抑制使E-钙粘着蛋白基因启动子区出现去甲基化.结论成功构建了能稳定表达的高效率 DNMT1的RNA干扰载体, 但目的基因沉默后其RNA表达水平与蛋白质表达水平表现不一致,评价siRNA干扰作用时应以目的基因相应蛋白质的表达水平为准.

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