摘要：目的构建在视网膜组织特异性表达的人血管内皮生长因子(VEGF)165基因. 方法用聚合酶链反应(PCR)方法从BLAB/C鼠全基因组扩增能在视网膜组织特异性表达的rho启动子,经限制性内切酶纯化后克隆于质粒pcDNA3.1+-VEGF165中,建立重组质粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,通过限制性内切酶酶切分析及PCR鉴定筛选出正确重组质粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介导转染人视网膜色素上皮细胞和人脐静脉内皮细胞,并通过免疫组织化学染色以及绘制细胞生长曲线检测在人视网膜色素上皮细胞和人脐静脉内皮细胞中VEGF蛋白的表达. 结果在人视网膜色素上皮细胞中,重组质粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比质粒pcDNA3.1+-VEGF165的VEGF蛋白表达强,在人脐静脉内皮细胞,两者的表达量无明显差别. 结论载体pcDNA3.1+-rho-VEGF165的构建为进一步研究VEGF在视网膜新生血管形成中的致病机理提供基础材料,并为进一步建立视网膜特异性表达VEGF转基因鼠模型建立了基础.

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