摘要：目的检测凝血酶受体活化过程中血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰ bα的动态分布及其细胞骨架蛋白的改变,揭示GP Ⅰ bα的异位分布机制与凝血酶受体在血小板信号传递中的作用.方法以凝血酶受体活化肽(thrombin receptor activating peptide,TRAP)诱导血小板活化,应用流式细胞术比较刺激前后血小板膜表面GPⅠ bα及P-选择素的表达,并通过转移电泳及免疫沉淀技术,分析细胞骨架中GP Ⅰ bα、肌动蛋白、肌球蛋白的变化.观测细胞松弛素(Cytochalasin)D与腺苷三磷酸双磷酸酶(Apyrase)Ⅶ对血小板活化过程的影响.结果TRAP作用后促使血小板活化,流式细胞术检测结果显示其P-选择素水平显著升高,而GP Ⅰ bα先呈现进行性减少,而后逐渐回升的可逆性变化.抑制剂作用后这一过程受到不同程度影响,其中细胞松弛素D能阻滞GPⅠ bα的内移,ApyraseⅦ对活化过程中GPⅠ bα的逆转没有影响,只对它的恢复起作用,促使GPⅠ bα迅速返回细胞表面.细胞骨架蛋白分析结果也表明肌动蛋白、肌球蛋白与GPⅠ bα受刺激后呈先增加后减少的动态变化趋势.细胞松弛素D能阻滞GPⅠ bα、肌动蛋白与肌球蛋白向骨架中心的转位,ApyraseⅦ则能加快骨架蛋白在骨架中心的消散.免疫印迹证实GPⅠ bα的这种可逆性变化与血小板膜骨架紧密相关.结论凝血酶受体活化在血小板信号传递过程中发挥了重要作用,导致GP Ⅰ bα由血小板膜表面向内转移而后又逐渐返回至胞膜外,这种动态变化与细胞骨架重组及二磷酸腺苷(ADP)有关.

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