摘要：目的探索利用先扩增后诱导的"两步法"从脐血(CB)CD34+细胞高效大量地获得树突细胞(DC).方法免疫磁珠法从CB分选获得CD34+细胞,以干细胞因子(SCF)、IL-3、Flt-3配体(FL)、Tpo组合刺激,扩增7 d、10 d和14 d(依次为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组)后以GM-CSF+IL-4+TNF-α诱导8 d或5 d获得DC,通过相差显微镜、电镜观察形态,流式细胞仪检测表型,混合淋巴细胞培养、ELISA法检测培养液上清IL-12含量评价其功能.结果CB CD34+细胞经SCF+IL-3+FL+Tpo刺激扩增7 d、10 d和14 d后细胞总数分别扩增了(53.39±20.59)倍、(307.17±119.59)倍和(1117.25±335.49)倍.经GM-CSF+IL-4+TNF-α诱导8 d后所得CD1a+细胞是扩增前细胞数的(21.40±16.70)倍、(143.20±60.35)倍和(150.80±42.16)倍,Ⅱ、Ⅲ组明显多于Ⅰ组(P＜0.05),但Ⅱ、Ⅲ组间无显著性差异(P＞0.05).所得DC的形态、表型及刺激异基因T细胞增殖能力、IL-12分泌量,三组无显著性差异(P＞0.05).当诱导时间缩短至5 d时,各组DC功能均显著下降(P＜0.05).结论CB CD34+细胞扩增7～10d再诱导8 d可以高效大量获得具有正常功能的DC,而扩增时间超过10 d并不能显著增加DC产量,诱导时间少于8 d将降低所得DC的功能.

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