摘要：目的构建含有人B7-H4基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达B7-H4基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共信号作用及可能机制. 方法从含人B7-H4基因的cDNA序列FLJ22418中,采用PCR扩增出B7-H4全长基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-HA-Term,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72 h后,经Zeocin筛选出稳定表达B7-H4蛋白的L929细胞株;采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析免疫分子的表达、3H-TdR掺入检测细胞增殖以及ELISA测定细胞因子的水平. 结果构建了含人B7-H4基因的重组逆转录病毒载体和获得含有B7-H4基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人B7-H4蛋白的L929转基因细胞;该转基因细胞对T细胞体外具有抑制增殖、活化和细胞因子分泌的作用. 结论构建了稳定表达人B7-H4蛋白的细胞株,B7-H4分子在体外通过抑制T细胞分泌IL-2和促进其凋亡作用可显著地下调T细胞功能的效应.

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