首页 期刊 中华实验外科 腺病毒介导转染人生长转化因子β1的脂肪干细胞复合多孔β-磷酸三钙支架体外培养的研究 【正文】

腺病毒介导转染人生长转化因子β1的脂肪干细胞复合多孔β-磷酸三钙支架体外培养的研究

作者:方忠; 杨琴; 熊伟; 李光辉; 肖骏; 李锋 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科; 武汉430030
脂肪干细胞   支架   组织工程  

摘要:目的观察腺病毒介导转染人生长转化因子β1(Ad—hTGF—β1)的脂肪干细胞(ADSCs)与多孔β-磷酸三钙(β-TCP)支架材料在体外复合培养,探讨它们之间的相容性以及其构建组织工程软骨的可行性。方法含增加型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒表达载体pAd—hTGF-β1,经包装、转染兔脂肪干细胞,筛选出成功转染Ad—hTGF-β1的ADSCs,然后将携Ad—hTGF—β1的ADSCs(密度1×10^6个/m1)与多孔β-磷酸三钙支架中行三维立体复合培养,定期扫描电镜观察细胞黏附能力、增殖活力以及形态学改变,并通过逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Western blot法和免疫组织化学法检测软骨特异性细胞外基质蛋白Ⅱ型胶原蛋向(CollagenⅡ)的表达。结果多孔β—TCP支架孔径在300~450μm之间,孔隙率65%;扫描电镜显示Ad—hTGF-β1的ADSCs与β—TCP支架材料在体外培养期间支架无塌陷及形变,且在支架上黏附、增殖良好,并能分泌软骨细胞外基质collagen Ⅱ,其分泌随时间呈增加的趋势。结论多孔β—TCP支架具有适宜的微孔结构、良好的生物相容性和软骨诱导作用,可以作为软骨组织工程较理想的支架材料。且其与转染Ad—hTGF—β1的ADSCs相结合有望构建组织工程软骨。

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