首页 期刊 中国医科大学学报 含人FABP4基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及鉴定 【正文】

含人FABP4基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及鉴定

作者:朱锦灿; 陈小宇; 祝爱珍; 刘成成; 刘善淘; 刘革修 暨南大学血液病研究所; 广州510632
fabp4   启动子   荧光素酶   质粒   转染  

摘要:目的构建含有人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)基因启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic-FABP4-promoter,为脂类代谢相关药物研究提供基础。方法根据已知人的FABP4基因启动子序列设计引物,以人DNA为模板,用PCR法扩增出人FABP4基因启动子的DNA大片段。经过限制性内切酶KpnI和XhoI双酶切后插入到pGL3-Basic载体中;测序鉴定;然后将这些重组质粒瞬时转染到K293细胞中,并在24h后检测其荧光素酶活性。结果构建的含荧光素酶基因的质粒,经酶切及测序鉴定结果显示FABP4启动子插入的位置和序列正确。转染细胞后检测其荧光显示:重组pGL3质粒转录活性较pGL3.Basic质粒明显增强(P〈0.001)。结论成功构建了pGL3-Basic.FABP4-promoter质粒,为进一步研究FABP4基因的表达调控提供了工具和基础。

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