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巢式甲基化特异性聚合酶链反应在p16基因启动子过甲基化检测中的应用

作者:姚群峰; 康新江; 宁勇; 唐朝晖; 周宜开 430030; 武汉; 华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所
巢式甲基化特异性聚合酶链反应   p16基因启动子   甲基化   检测   非小细胞肺癌  

摘要:目的介绍巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)法,探讨了最佳PCR扩增条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态.方法将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,将所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变.设计针对甲基化和非甲基化等位基因特异引物,进行巢式聚合酶链反应扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段.结果在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子甲基化.用甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)和nMSP法分别检测34例非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清,p16基因启动子甲基化阳性率分别为53%(18/34)和74%(25/34), nMSP法具有更高的灵敏度.结论筑巢式甲基化特异性聚合酶链反应是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析.

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