摘要：目的建立重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系.方法 10例重型乙型肝炎患者血清提取HBV DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增HBV全基因.PCR产物构建到pUCm-T载体上,转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞,经酶切鉴定,获得含3.2 Kb HBV DNA的重组克隆菌,全基因测序,分析各读码框核苷酸和氨基酸变化.结果 4例成功构建HBV DNA克隆,并完成全基因测序.其中3例在前C区发生G1896A变异,产生一个终止密码子,导致HBeAg缺失;1例在C启动子区1762、1764双位点出现突变;有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知细胞毒T淋巴细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞的细胞表位.结论该法可用于临床研究H B V病毒基因结构与重型乙型肝炎发病的关系,并为进一步研究其H B V基因功能奠定基础.

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