摘要：目的构建携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒,并在真核细胞中表达.方法在pBR322-B-HBV质粒(含adrⅠ型HBV DNA)中插入人工合成片段破坏其HBV-X基因区,再与IFN-5α片段连接,最后克隆人真核表达载体pcDNA3,获得携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α.同时构建两组对照质粒,即连接完整HBV DNA的真核表达质粒和连接X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒,将上述3种质粒以脂质体法同时转染HepG2细胞,G418筛选出稳定表达系统后选用荧光定量PCR法、ELISA法、RT-PCR法检测3种包装病毒的复制表达以及IFN-5α的表达水平.结果获得目的真核表达质粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α;目的质粒转染HepG2细胞后其包装病毒的复制表达水平均较两个对照组降低;插入的IFN-5α片段可以在mRNA以及蛋白质水平表达.结论成功构建携带人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表达质粒,并能在HepG2真核细胞中表达.

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