首页 期刊 中国组织工程研究 重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制 【正文】

重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制

作者:韦莉莉; 王月刚; 陈娓; 唐其东; 赖艳娴; 胡英芳; 吴平生 南方医科大学南方医院心内科; 广东省广州市510515
腺病毒   细胞周期停滞  

摘要:背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚。 目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α(Ad—HIF—1α—Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制。 设计、时间及地点:对照实验,于2007—03/12在南方医科大学中医实验中心完成。 材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α —Ala564-Ala803和对照病毒Ad—lacZ载体为自行构建。 方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α —Ala564-Ala803和对照病毒Ad—lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞。 主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平:MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化。 结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上。②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=-0.945,P〈0.05)。③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P〈0.05)。 结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α -Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系。②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期。

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