摘要：目的构建pEGFP—N1－CKB真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI—H520中，建立稳定转染的NCI—H520细胞系，为后续研究奠定基础。方法以人CKBcDNA文库为模板，用PCR扩增人CKBcDNA的编码区，并将扩增的cDN段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中。重组子经酶切分析及测序鉴定后，用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI—H520，经G418筛选并建立稳定的转染细胞株，应用Westernblot检测转染前后该细胞株CKB基因的表达。结果pEGFP—N1－CKB经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确，真核表达载体构建成功；经Westernblot检测，重组质粒转染株中CKB基因的表达水平明显高于对照组，证实CKB基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达。结论成功构建了pEGFP—N1－CKB真核表达质粒，建立了稳定表达CKB的NCI-H520细胞系，为进一步研究CKB的生物学功能奠定了基础。

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