摘要:目的构建人外周血T细胞CCR7报告基因载体并初步验证IL-18对其作用的影响。方法提取健康献血员全基因组DNA,克隆包含人CCR7上游启动子的基因序列,酶切、连接形成重组质粒后转化感受态细菌,酶切及测序后构建报告基因质粒,瞬时转染真核细胞COS,荧光素酶报告基因分析。结果pGL3-basic报告基因质粒与空白对照相比可以检测到荧光素酶基因表达0.024±0.008;含有启动子基因的荧光素酶活性明显高于pGL3-basic(P〈0.01);IL-18作用后报告基因荧光素酶基因的表达明显增加比单独使用pGL3-2233或pGL3-1037质粒DNA转染COS时明显增加(P〈0.01)。结论成功构建包含有人CCR7启动子的报告基因载体,并且初步验证IL-18可以直接激活CCR7基因上游调控区的启动子,激活CCR7基因表达,从基因水平直接找到IL-18对CCR7表达调控的证据。
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