摘要：目的建立体外细胞病毒感染模型,基于细胞自噬探讨千金藤素抗HSV-1病毒感染的作用及其机制。方法用不同浓度(0.75,1.5,3 mg·L^-1)的千金藤素作用于感染HSV-1的Vero及Hela细胞,采用空斑实验法检测细胞的病变效应;采用Western印迹法检测病毒蛋白gB、gD及自噬信号通路相关蛋白TBK1,p62,LC3的表达水平;用透射电镜检测自噬泡的形成;采用工具药氯喹体外干扰自噬的发生。结果病毒对照组空斑形成数及病毒蛋白gB、gD的表达明显高于细胞对照组,其自噬相关蛋白LC3在4~12 h表达明显升高,12~48 h表达逐渐降低。与病毒对照组相比,千金藤素能明显降低空斑的形成及gB、gD的表达,且呈剂量依赖性,其半数中毒浓度TC50为5.4 mg·L^-1,半数抑制浓度IC50为0.835 mg·L^-1,治疗指数TI为6.47,表明千金藤素具有体外抗HSV-1的作用;进一步实验结果显示,高、中剂量组千金藤素能持续促进自噬蛋白LC3的表达及自噬泡的形成,同时能增加TBK1及P62蛋白的磷酸化水平;氯喹阻断自噬后,千金藤素对HSV-1毒性蛋白gB、gD的抑制能力明显降低。结论千金藤素能通过激活细胞自噬发挥体外抗HSV-1病毒作用,与其TBK1的激活密切相关。

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