摘要：谷氨酸脱氢酶可在NAD（P）H辅因子协助下催化α-酮戊二酸和谷氨酸之间的转化,是氮代谢途径的关键酶。基于基因组BLAST分析预测,吸水链霉菌5008（S5008）中SHJG7666是谷氨酸脱氢酶的编码基因。本研究在大肠杆菌中对SHJG7666蛋白进行了异源表达,并对其酶学性质进行了表征。系统发育树及同源建模结构分析显示SHJG7666具有保守的谷氨酸、α-酮戊二酸结合域以及经典的GXGXXG二核苷酸结合基序,其活性中心由Lys^60,Lys^78,Asp^120催化功能位点及Ser^36,Gly^38,Gln~（119）,Asp^166,Asn^300,Ala^330谷氨酸、α-酮戊二酸结合位点组成,属于Glu/Leu/Phe/Val脱氢酶家族;体外生化实验显示,其催化α-酮戊二酸转化为谷氨酸的最适p H和温度分别为7.5和37℃,对底物α-酮戊二酸Km为（25.3±9.1）μmol/L,kcat为（3±0.8）×10^-5s^-1。本研究验证了SHJG7666谷氨酸脱氢酶的催化功能,揭示了其活性中心关键氨基酸残基,为利用蛋白质工程手段对SHJG7666进行分子设计以提高其催化活力,进一步利用代谢工程手段对宿主氮代谢进行调控奠定了基础。

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