摘要：目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcDNA3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础. 方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcDNA3.1/myc-his-B中,构建pcDNA3.1/hVEGF165重组体.用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Western blotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白. 结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcDNA3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达. 结论构建的pcDNA3.1/hVEGF165 转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白.

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社