首页 期刊 中国现代医学 高通量端粒酶抑制剂筛选模型融合表达载体的构建及转化 【正文】

高通量端粒酶抑制剂筛选模型融合表达载体的构建及转化

作者:王卫国; 曹莹; 张群; 张慧敏; 刘晓萍; 孔焕育; 庞建新; 吴曙光 南方医科大学药学院新药评价中心; 广东广州510515
htert   酵母三杂交   端粒酶抑制剂  

摘要:目的构建含不同结构域的人端粒酶逆转录酶(hTERT)酵母三杂交系统融合蛋白表达载体并转化酵母。方法采用PCR法从pCLXSN—hTERT质粒中提取不同的hTERTcDN段,纯化分离定向克隆到pYESTrp3质粒,构建包含不同hTERT蛋白结构域的编码序列的重组质粒,转化大肠杆菌,经PCR、酶切、测序鉴定,将阳性重组质粒转化酵母菌,进行毒性和自激活检验。结果经过测序验证,重组融合蛋白表达载体pYESTrp3-hTERT构建成功,转化酵母无毒性和自激活性。结论成功构建能用于酵母三杂交系统的融合蛋白表达载体。可于酵母三杂交系统筛选端粒酶抑制剂及hTERT和hTR间的相互作用。

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