摘要：目的利用Cre-loxP特异性位点基因重组技术构建大鼠Smad1的重组腺病毒。方法巢式PCR得到大鼠Smad1全部开放阅读框架序列，克隆到质粒pCR—BluntⅡ—TOPO中，然后将目的基因片段连接到中间载体质粒pDNR-CMV，测序后在Cre重组酶作用下，将Smad1cDNA转移到腺病毒载体pLP—Adeno—x—CMV。在HEK293细胞中包装和扩增重组腺病毒，并检测Smad1基因重组腺病毒在大鼠肝脏星状细胞系HSC-T6中的表达和功能。结果PCR法和限制性内切酶XholI消化法均证实Smad1重组腺病毒的成功构建，RT—PCR和WesternBlot检测证实该重组腺病毒显著性增强了HSC—T6细胞中Smad1的mRNA、蛋白表达及其磷酸化水平。结论Cre—loxP特异性位点基因重组技术是一种快速、高效构建基因重组腺病毒的方法，大鼠Smad1基因重组腺病毒的成功构建为与Smad1有关的细胞信号调控以及基因治疗提供了良好的工具。
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