摘要：目的 探讨异钩藤碱（Isorhynchophylline,IRN）人胶质瘤细胞SH-SY5Y细胞自噬的发生及其与mTOR信号通路的关系。方法 用不同浓度IRN（6、12和24μmol/L）处理SH-SY5Y细胞24h,免疫印迹法检测自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ的表达,免疫荧光法观察微管相关蛋白轻链3（LC3）荧光斑点标记的自噬体形成,利用溶酶体稳定剂氯喹（CQ）以及自噬抑制剂3-MA进一步明确IRN作用的途径。Western蛋白印迹法检测mTOR相关蛋白和Beclin1的表达。结果 IRN作用SH-SY5Y细胞24h后,可显著上调LC3-Ⅱ表达,0、6、12、24μMIRN作用后的相对表达量分别为（0.086±0.02）、（0.39±0.14）、（0.96±0.09）、（1.93±0.14）。自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增高（P〈0.01）,并呈浓度依赖性,SH-SY5Y细胞内GFP-LC3荧光斑点标记的自噬体增多,在IRN不同浓度处理组（0、6、12、24μM）中分别为2±1/细胞,4±1/细胞,8±1/细胞,和14±2/细胞。IRN联合CQ后可以促进LC3-Ⅱ的表达（0.64±0.052）。IRN可以削弱a-Syn蛋白表达,在0、6、12、24μM组中的相对表达量为（0.71±0.07）、（0.69±0.05）、（0.53±0.04）、（0.36±0.034）,并呈浓度依赖性,联合3-MA后a-Syn表达上调（0.63±0.04）,提示3-MA可以逆转由IRN对a-Syn的抑制效果,而CQ对a-Syn表达,与对照组比无显著影响。信号通路研究提示,对mTOR以及Beclin1表达不影响,Beclin1特异性siRNA作用后可以抑制IRN诱导的LC3-Ⅱ表达。结论 IRN可诱导SHSY5Y细胞自噬的发生,其机制为mTOR非依赖性自噬途径,Beclin1的表达可以影响IRN诱导的自噬。

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