摘要：目的建立RT-ARMS-qPCR（real time-amplification refractory mutation system-quantitative PCR）系统定量测定含线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）A1555G位点突变的片段的拷贝数,为阐明线粒体耳聋临床表型多样性的分子生物学基础奠定基础。方法根据ARMS的基本原理设计引物,在引物3’端插入错配碱基AC建立RT-ARMS-qPCR系统,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。经PCR分别扩增相应突变型和野生型的片段,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,构建质粒标准品;同时对含突变型和/或野生型mtDNA 1555位点的片段的拷贝数进行定量检测。结果RT-ARMS-qPCR系统用于检测含mtDNA 1555位点的片段,线性检测范围为102-108拷贝数/μl,检测灵敏度为1×102拷贝数/μl,其批内变异系数（CV）为1.34%,批间CV为1.96%,重复性好;突变型和野生型引物分别只扩增相应片段,特异性好。结论RT-ARMS-qPCR系统适合于定量检测含mtDNA A1555G点突变的线粒体DN段,结果稳定、准确,有助于阐明线粒体耳聋严重程度的分子基础。

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