摘要：目的:寻找并鉴定肿瘤相关抗原Eps8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位,为临床开展基于Eps8表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法:通过在线生物学软件从C-末端酶切位点、MHC-I类分子结合力及TAP转运效率3个方面初步预测Eps8抗原的HLA-A*0201限制性CTL表位,通过肽/MHC分子结合力及肽/MHC分子复合物稳定性实验初步验证预测结果,利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immuospot assay,ELISPOT)方法检测候选表位刺激健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC)分泌IFN-γ的能力,以及LDH细胞毒实验验证其体外杀伤肿瘤细胞的功能,最后在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠中检测候选表位的体内免疫功能。结果:通过在线生物学软件筛选得到4个候选表位。结合力实验结果显示,p360-368具有高结合力,p101-109、p276-284具有中等结合力。稳定性实验结果显示,该3个表位的DC50均大于8 h。LDH细胞毒实验中p101-109、p276-284、p360-368都能诱导产生特异性CTL,对靶细胞具有显著的杀伤效应,还能提高效应细胞分泌IFN-γ的水平。在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠体内免疫功能检测中同样证实该Eps8抗原表位能产生强烈的免疫应答。结论:天然表位p101-109、p276-284、p360-368可能是Eps8抗原HLA-A*0201限制性CTL表位。

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