摘要：利用PCR方法,从肠出血性大肠杆菌O157:H7的基因组DNA中,分别扩增出Stx1B和Stx2B亚基的结构基因片段,然后再通过PCR将这2个片段连接起来,并定向克隆到表达质粒pET28a的Nco I和EcoR Ⅰ位点之间,构建了重组表达质粒pMB1.将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中,对重组菌株BL21(pMB1)用IPTG进行诱导表达,并对最佳诱导时间进行了探索.SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了16 300的目的蛋白Stx2B-L-Stx1B;经薄层扫描分析表明,表达量约占菌体总蛋白的68.4%,且目的蛋白为包涵体表达,表达量约占细菌沉淀的84.6%.研究还表明,未用IPTG诱导的BL21(pMB1)菌株也可有少量目的蛋白的基础表达.不同诱导时间的结果表明,在3～7 h的诱导时间内,目的蛋白的表达量没有明显变化.

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