中国兽医科学杂志

牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：刘占悝; 刘泽余; 李智杰; 孙飞雁; 郭利 刊期：2020年第02期

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒,本研究建立了牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。通过设计特异性引物扩增病毒基因,将扩增的目的片段(119 bp)连接到pMD19-T载体中,构建重组质粒。将重组质粒作为阳性标准品,用于SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立。结果显示,特异性引物扩增的目的片段约为119 bp,符合预期的大小,...

PDCoV和PEAV二重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作者：黄海鑫; 宋心玥; 汪伟; 李笨; 王茂鹏; 肖朋朋; 郑敏; 金宁一; 孙文超; 鲁会军 刊期：2020年第02期

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪肠道α冠状病毒(PEAV)是两种新发现的猪传染性冠状病毒,临床上均以腹泻症状为主,症状相似,临床上难以快速诊断。为建立一种快速、准确区分PDCoV和PEAV的二重RT-PCR方法,本研究根据PDCoV和PEAV N基因序列,分别设计2对特异性引物,以阳性质粒为模板,对二重RT-PCR反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性试验。结果显示,所...

高致病性H7N9流感病毒荧光RT-PCR检测方法的建立

作者：陈轩; 黄海超; 杨素; 邵建宏; 沙才华; 赵福振; 罗宝正; 廖秀云 刊期：2020年第02期

2017年初在中国出现的H7N9流感病毒变异株表现出对禽高致病性的特征,根据高致病性H7N9流感病毒(HP-H7N9)的HA基因序列,设计1组HP-H7N9特异性的引物和探针,在对反应体系进行优化的基础上,建立了HP-H7N9的荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性、敏感性和重复性试验,制作了标准曲线。结果显示,本方法只对HP-H7N9特异性扩增,而对低致病性H7N9病毒(LP-H7...

A型塞内卡病毒VP2蛋白间接ELISA检测方法的建立

作者：申珊; 史雪坤; 李蕊; 马玉忠; 秦建华; 汪恩强 刊期：2020年第02期

为建立一种检测塞内卡病毒VP2蛋白的间接ELISA方法,本试验将A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了筛选。结果显示,VP2蛋白包被量为2μg/m L(1∶1000稀释);用2%BSA封闭液稀释标准阳性血清为1∶20;二抗做1∶5000稀释;TMB底物显色液室温避光显...

传染性法氏囊病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：王晓丽; 钱晶; 马孙婷; 王晶宇; 夏兴霞; 诸玉梅; 郑素雅; 王永山; 欧阳伟 刊期：2020年第02期

为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法,本研究首先将VP2基因分3段(部分序列重叠),分别为VP2(1~600)、VP2(376~975)和VP2(751~1350),并根据大肠杆菌对密码子的偏爱性进行优化,将优化的3个VP2基因片段分别克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western-blot,结果3个重...

口疮病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

作者：孙正楠; 张焕容 刊期：2020年第02期

为建立检测口疮病毒(orf virus,ORFV)抗体的间接ELISA方法,原核表达口疮病毒B2L蛋白与6×组氨酸标签的重组蛋白;对纯化复性后的重组B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的重组B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测ORFV抗体的间接ELISA,并进行特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用所建立的间接ELISA对来自四川部分地区的384份山羊血清样品...

旋毛虫IFN-γ诱导的溶酶体硫醇还原酶对大鼠外周血单个核细胞功能的影响

作者：储稳; 廖书漪; 卡力比夏提·艾木拉江; 徐立新; 宋小凯; 李祥瑞; 严若峰 刊期：2020年第02期

适合鸭瘟病毒弱毒增殖的MHC单倍型鸭胚肝间充质干细胞的建立

作者：佟相慧; 问婉欣; 陈洪岩; 韩凌霞 刊期：2020年第02期

为了建立适于鸭瘟病毒(DPV)弱毒增殖的细胞系,利用4个主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭品系,体外分离鸭胚肝细胞,在干细胞因子、白细胞抑制因子和成纤维细胞生长因子诱导下,获得鸭胚肝间充质干细胞(DuLMSC)。接种DPV疫苗株C-KCE后,结果显示:F1~F10代均能稳定出现CPE;将F10病毒接种细胞24 h后,通过扫描电镜在胞质、胞核及细胞间隙均能够观察到...

2017—2019年猪流行性腹泻病毒广西流行毒株遗传多样性分析

作者：王睿敏; 施开创; 严瑾; 谢守玉; 黎宗强; 尹彦文; 陆文俊; 屈素洁 刊期：2020年第02期

为掌握广西猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传变异情况,本研究对2017-2019年从广西各地采集的腹泻样品,应用RT-PCR方法进行检测,并随机选取部分PEDV阳性样品进行S、M、N基因的扩增、测序和分析。结果显示,共获得PEDV S基因序列23株、M基因和N基因序列各25株。同源性分析显示,广西流行毒株间核苷酸和氨基酸序列同源性在S基因为90.6%~100%和89...

1株抗须癣毛癣菌枯草芽孢菌的鉴定

作者：刘彦威; 姬晶晶; 刘建钗; 刘娜; 柳焕章; 杜娟; 杨子龙; 刘利强 刊期：2020年第02期

为了探讨抗须癣毛癣菌感染新的治疗途径,从患须癣毛癣菌病兔自然恢复皮肤分离了1株细菌,经16S rDNA基因比对,并结合菌落形态进行了鉴定,通过体内外试验测定其对须癣毛癣菌的拮抗作用。结果显示,分离株能在营养琼脂培养基生长,菌落为皱褶圆形,菌体呈杆状,革兰染色阳性,基因序列分析与GenBank中的枯草芽孢杆菌相似率为99.8%,该分离株被鉴定为枯草...

牛结节性皮肤病防控技术研究现状及其策略

作者：景志忠; 何小兵; 陈国华; 贾怀杰; 房永祥; 陈思睿; 杨帆; 吕彦蓉; Takele; Tesgera; HURISA; 王国蒨; 殷宏 刊期：2020年第02期

2019年8月我国新疆伊犁地区首次爆发牛结节性皮肤病,为做好该病的防控工作,防止外来疫情扩散蔓延到我国内地,现将该病防控的诊断检测技术、疫苗研发状况以及我国的策略进行概括介绍,为有效控制、净化和根除该病提供指导。

非洲猪瘟病毒感染免疫反应的研究进展

作者：张振东; 姚伟民; 卞婷; 唐旭东; 吴萍 刊期：2020年第02期

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种危害全球养猪业的灾难性疾病,临床上以急性、热性、出血性、高发病率和高死亡率为特征。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,也是我国必须上报的一类动物疫病。自上世纪二十年代出现以来,有关非洲猪瘟病毒的病原特性、流行特点以及免疫应答等多个方面的研究虽然已经开展,但是我们对其仍然...

人工感染禽腺病毒血清4型对鹅天然免疫反应的影响

作者：李雪峰; 姜磊; 孙金艳; 李慧昕; 马得莹 刊期：2020年第02期

重组猪源CD40L体外诱导猪肺泡巨噬细胞IL-1β和TNF-α的分泌

作者：安一娜; 原慧; 范阔海; 尹伟; 孙娜; 姜俊兵; 李宏全 刊期：2020年第02期

本试验旨在研究重组猪源CD40L蛋白(recombinant porcine CD40L,rpCD40L)的生物学活性。利用Alexa Fluor 488标记rpCD40L后,在体外与CD40+原代猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)作用,荧光显微镜观察rpCD40L与PAMs的结合,并通过qPCR、ELISA检测作用12 h和24 h后PAMs IL-1β和TNF-αm RNA与蛋白水平的变化。结果显示,荧光标记的rpCD...

酮洛芬注射液在乳牛体内的残留消除研究

作者：王波; 曾艺元; 邬嘉豪; 沈祥广; 贺利民; 曾振灵; 曾东平 刊期：2020年第02期

为建立牛乳中酮洛芬的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,牛乳样品经甲醇提取,C18色谱柱分离,采用正离子模式,多反应监测,内标法定量。结果表明,牛乳中酮洛芬的检出限为1μg/kg,定量限为5μg/kg,在5~200μg/kg范围内线性关系良好,相关系数大于0.99。在25~100μg/kg添加水平的回收率为93.3%~107.5%,批内、批间相对标准偏差分别为1.72%~5.46%、1.13...