中国兽医科学杂志

应用旋毛虫GAD和GLS重组抗原建立间接ELISA方法的研究

作者：张妍; 孟诗; 李晓云; 于洁; 李成; 王爽; 许浒; 孟小晴; 杨啸; 宋铭忻 刊期：2019年第05期

为了建立快速检测猪旋毛虫病的血清学方法,分别用旋毛虫GAD、GLS重组蛋白作为包被抗原,建立2种检测旋毛虫血清抗体的间接ELISA方法。对抗原包被条件、血清稀释度、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗的稀释度与孵育时间和TM B作用时间等条件进行了优化。旋毛虫GAD包被抗原间接ELISA方法和GLS包被抗原间接ELISA方法的阴阳性临界值分别为0.848和0.9...

绵羊痘病毒和山羊痘病毒实时荧光重组酶聚合酶检测方法的建立

作者：杨俊; 聂福平; 周庆; 王昱; 史梅梅; 李贤良; 王国民; 吴蕊; 张欢; 陈冉越; 唐昌杰; 刘生峰; 李应国 刊期：2019年第05期

为建立一种快速、敏感鉴别诊断绵羊痘病毒(SPPV)和山羊痘病毒(G TPV)的方法,本研究根据SPPV和GTPV基因组保守区,分别设计特异性引物和探针,建立了SPPV和GTPV实时荧光RPA (real-time fluorescent recombinase polymerase amplification)检测方法。结果显示,该方法仅对SPPV和GTPV的靶基因扩增呈阳性,而对牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、传染性脓疱病毒...

我国羊巴贝斯虫棒状体颈部蛋白RON2基因的克隆与结构和遗传进化分析

作者：徐建林; 王锦明; 刘军龙; 刘爱红; 李有全; 殷宏; 罗建勋; 关贵全 刊期：2019年第05期

用牛巴贝斯虫棒状体颈部蛋白RON2基因序列BLAST我国羊感染的2种巴贝斯虫全基因组数据库,以获得的RON2基因保守序列片段为模板设计PCR引物;从6株羊巴贝斯虫基因组DNA和c DNA中扩增RON2基因全长序列,分析其基因结构特征;并通过序列比对和进化树构建,分析我国羊巴贝斯虫的遗传进化关系。结果显示,该基因无内含子,羊巴贝斯虫未定种新疆株/敦煌株(Bsp...

毛皮兽阿留申病毒SYBR Green Ⅰ-qPCR检测方法的建立及病毒种鉴别

作者：韦韬; 吴艳虹; 丛丽; 赵永强; 邵西群 刊期：2019年第05期

为建立快速定量检测、鉴别毛皮兽阿留申病毒的SYBR Green ⅠqPCR方法,以阿留申病毒属内病毒序列为参考,在VP2序列高变区的保守区段设计合成1对引物。结果,该方法检测水貂阿留申病毒(AMDV)、狐貉阿留申病毒(RF AV)的最低浓度分别为5.38×10~2copies/μL、5.93×10~2copies/μL,且通过熔解曲线可区分鉴别不同病毒种。对55份临床样品以及4株RFAV进行定...

双芽巴贝斯虫Hsp20一新基因型的发现及生物学特性分析

作者：曲志强; 张亮; 罗金; 陈泽; 任巧云; 刘文阁; 倪军; 许肖枫; 吴泽功; 罗建勋; 殷宏; 孙晓林; 刘光远 刊期：2019年第05期

为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的18种不同物种的氨基酸序列构建遗传发育树,结果表明本实验获得的双芽巴贝斯虫与美国株和中国新疆株的亲缘关系...

旋毛虫ES抗原致小鼠骨髓源树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶表达的影响

作者：翟鹏; 李晓云; 刘昊; 宋铭忻; 路义鑫; 孙红星; 韩彩霞 刊期：2019年第05期

弓形虫H4和Rab2基因真核表达载体的构建及其对N2a细胞凋亡和自噬的影响

作者：李贵峰; 孟婷婷; 杨子鹏; 王亚培; 袁子国 刊期：2019年第05期

本研究旨在探索弓形虫Rab2和H 4基因在神经细胞凋亡和自噬过程中的作用,并进一步研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对其的影响。本试验以弓形虫M e49虫株c DN A为模板,扩增H4和Rab2基因,并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),同时设置RAPA给药组,检测目的基因及凋亡和自噬相关蛋白的表达情况。结果显示,重组质粒成功构...

鼠伤寒沙门菌5’-nucleotidase基因缺失株的构建及其生物学特性的研究

作者：张梦珂; 廖成水; 毛福超; 王晓利; 张春杰; 李银聚; 吴庭才; 程相朝 刊期：2019年第05期

为了探究5’-nucleotidase基因的功能及其在鼠伤寒沙门菌感染中的作用,本研究首先构建缺失1112 bp的5’-nucleotidase基因的重组自杀性质粒pR E 112Δ5’-nucleotidase,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选出SL1344Δ5’-nucleotidase缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。PCR及测序结果表明,SL1344Δ5’-nucleotidase构建成功,...

牛白血病病毒前病毒DNA荧光PCR检测方法的建立及应用

作者：王建华; 王玉玲; 张俊哲; 赵丹; 肖妍; 王乃福; 陈本龙; 董志珍 刊期：2019年第05期

为快速检测牛外周血淋巴细胞中的牛白血病病毒(bovine leukem ia vir,uBsLV)前病毒DNA,选取BLVenv基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立检测牛白血病前病毒DNA的荧光PCR方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价及实际样本的验证检测。结果显示,该方法具有很高的特异性和重复性,最低检出限为每个反应可检出...

光滑念珠菌SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：刘利强; 宋阔阔; 李慧芳; 赵云环; 赵诚睿; 柳焕章; 刘建钗; 张鹤平; 闫金坤; 刘彦威; 刘娜 刊期：2019年第05期

为建立光滑念珠菌快速准确灵敏的检测方法,根据GenBank已发表的光滑念珠菌rDNA内转录间隔区核苷酸序列设计1对特异性引物,应用SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测光滑念珠菌,对临床分离的多株不同来源光滑念珠菌病料进行检测,通过临床常见的5种病原真菌对该方法的特异性进行检验,并用人工感染小鼠的血液、肝脏组织样本对所建方法进行检验。结果...

禽呼肠孤病毒σA基因对鸡胚成纤维细胞天然免疫相关基因转录水平的调控影响

作者：黄莉; 谢芝勋; 谢丽基; 王盛; 黄娇玲; 范晴; 罗思思; 张艳芳; 曾婷婷; 张民秀; 邓显文; 谢志勤 刊期：2019年第05期

表面展示柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性研究

作者：张赞; 刘晶; 高兴; 刘洋; 姜延龙; 王春凤; 杨桂连 刊期：2019年第05期

为了研究表达pgsA′-EtMIC2融合蛋白的侵入型乳酸菌的免疫特性,将pgsA′-EtMIC2基因片段插入到载体pSIP409-FnBPA中,得到pSIP409-FnBPA-pgsA′-EtMIC2重组质粒,并用电转化的方式转入植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建表面展示EtMIC2蛋白的侵入型乳酸菌。通过检测免疫雏鸡外周血淋巴细胞中CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+T淋巴细胞的发育情况,血清中EtMIC2...

犬腺病毒1型对犬北极狐和银狐的致病性比较

作者：孙杰; 秦飞燕; 朱言柱; 薛向红; 王洋; 廉士珍; 张蕾; 赵辉; 柴秀丽; 闫喜军 刊期：2019年第05期

Poly(I∶C)增强口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的研究

作者：罗新; 孙世琪; 滕志东; 白满元; 穆素雨; 郭慧琛; 蔺国珍 刊期：2019年第05期

口蹄疫是一种高度接触性传染病,严重影响着畜牧业的健康发展。目前主要通过接种疫苗对其进行预防。近年来,病毒样颗粒(virus-like partic,lVeLsPs)疫苗由于具有天然病毒相似的结构、不含有病毒的遗传物质、易被免疫细胞识别等优点,逐渐成为研究的热点。为了进一步提高口蹄疫VLPs疫苗的免疫效果,本研究选取poly(I∶C)联合ISA 201共同使用,以探究p...

猪捷申病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR方法的建立

作者：杨涛涛; 张凌倩; 谢明旺; 李昕岳; 钟婷 刊期：2019年第05期

为建立一种快速且灵敏的猪捷申病毒(PTV)的检测方法,本研究根据登录于GenBank数据库的所有PTV毒株基因组序列信息,在其5’端非编码区的保守区域设计引物,经过一系列的试验测试和验证建立了能够广泛用于检测PTV的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法。该方法特异性强,对除PTV外的其他常见猪病毒性病原的DNA或cDNA均无特异性的扩增。此外,该方法的敏...