中国兽医科学杂志

牛细小病毒DPO-PCR检测方法的建立

作者：王孟孟; 李振雪; 汤婷婷; 王瑞翀; 王丽; 徐义刚; 唐丽杰; 李一经; 乔薪瑗 刊期：2019年第03期

为建立牛细小病毒的快速检测方法,以牛细小病毒VP2基因为靶基因,设计了1对双启动寡核苷酸(dual-priming oligonucleotide,DPO)引物,建立了牛细小病毒DPO-PCR快速检测方法。退火温度不敏感试验、特异性试验和灵敏度试验的结果显示,与常规PCR方法相比,DPO-PCR方法在41~65℃退火温度范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感;...

猪塞尼卡病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作者：刘健新; 查云峰; 鲁荣; 任旭皎; 黎振标; 李慧子; 张彭涛; 宁章勇 刊期：2019年第03期

本研究根据猪塞尼卡病毒(SVA)VP1基因保守序列设计引物,通过优化反应条件,建立了实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性的评价。结果显示,该检测方法特异性好,灵敏度达10 copies/uL,变异系数均小于2.0%,操作简单,耗时短。利用建立的检测方法对124份临床样本进行检测,结果,阳性率为3.2%。上述结果表明,本研究建立的荧光定...

流行性出血病病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：杨振兴; 朱建波; 廖德芳; 李占鸿; 肖雷; 高林; 李楠; 杨恒; 李华春 刊期：2019年第03期

为建立流行性出血病病毒(EHDV)群特异性核酸检测方法,本研究根据GenBank中登录的EHDV毒株内衣壳结构蛋白VP7基因的保守区,设计并合成1对特异性引物,建立了一步法RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性、敏感度和临床样品的检测试验。结果表明,该方法能特异性地检出不同地区分离的不同血清型EHDV,而对蓝舌病病毒(BTV)、中山病病毒(CHUV)和赤羽病病毒...

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用

作者：赵洪哲; 范峻豪; 李新培; 王昊; 关平原; 温永俊 刊期：2019年第03期

为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水。利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间...

大片吸虫钙结合蛋白2基因的克隆表达及其表达产物的免疫活性研究

作者：袁晓丹; 张念章; 黄思扬; 马元元; 王春仁; 朱兴全 刊期：2019年第03期

通过克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白2(FgCaBP2)基因,旨在探索其作为诊断抗原的可行性。在分析大片吸虫蛋白组数据的基础上,根据肝片吸虫CaBP2基因组序列和转录组数据,设计以NdeⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物。以大片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR获得FgCaBP2基因,对其进行测序、生物信息学分析。构建pET-30a-FgCaBP2重组表达载体,在大肠杆菌Transett...

猪流行性腹泻病毒细胞适应毒LJB-03株在三种Vero细胞上增殖效果的比较

作者：郭卫龙; 解伟纯; 侯星宇; 李智力; 姜艳平; 崔文; 王丽; 乔薪瑗; 周晗; 徐义刚; 李一经; 唐丽杰 刊期：2019年第03期

为探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)细胞适应毒LJB-03株在3种Vero细胞上的增殖特性,分别以正常Vero细胞、适应无血清培养基的Vero细胞和稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)的Vero/TMPRSS2细胞(繁殖PEDV时无须添加胰酶)为宿主细胞,繁殖PEDV LJB-03株,观察这3种细胞接毒后的病变特点和病变时间,利用空斑法比较其增殖特性,并以间接免疫荧光和电镜技术鉴...

虎源副流感病毒5型的分离鉴定及全基因序列分析

作者：陈安妮; 李冰; 霍礼侠; 吴佳骏; 邹舒展; 陈武; 罗满林 刊期：2019年第03期

本研究旨在了解虎源副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)的遗传变异情况,阐明其基因组与遗传进化等特征。从广东省某动物园疑似虎PIV5感染的病料处理后接种Vero细胞并通过一系列的鉴定,将分离的毒株命名为HMZ。根据GenBank中PIV5基因序列,设计包含全长的12对特异性引物,并扩增其全基因组。将扩增产物克隆到pMD-18T载体上,对鉴定为阳性的...

草原革蜱和森林革蜱形态结构与分子标记的比较

作者：周鸿铭; 程天印; 段德勇 刊期：2019年第03期

为了比较草原革蜱(采自内蒙古呼伦贝尔)和森林革蜱(采自宁夏固原)的形态结构与分子标记异同点,借助体视显微镜超景深系统观察了这2种蜱的形态结构;通过分子生物学技术,测定了这2种蜱COX1、ITS2及16S rDNA基因序列,并通过比对这3种基因的同源性、构建系统发生树,分析了这2种蜱的分子标记差异。结果显示,这2种蜱均具有珐琅斑,须肢粗短,缘垛整齐等...

四川部分区域鸽源沙门菌携带情况的调查及其部分生物学特性的分析

作者：张跃东; 罗薇; 葛润洲; 杨劲松; 张焕容; 任玉鹏; 钟红梅 刊期：2019年第03期

少孢节丛孢菌Aoz1基因的生物信息学分析及原核表达条件的优化

作者：尹相吉; 王新芳; 聂福贵; 郭少平; 钱英红; 陈湘江; 乔一丹; 李泽浩; 符江涛; 杨晓野; 王瑞 刊期：2019年第03期

为获悉少孢节丛孢菌内蒙古株Aoz1基因的详细信息,以研究捕食线虫性真菌对线虫的作用机制,本试验以捕食线虫性真菌的代表种--少孢节丛孢菌内蒙古株为研究对象,首先扩增其胞外丝氨酸蛋白酶的基因编码序列,并进行生物信息学分析,然后将其构建至原核表达载体pET-32a中,再转化至Transetta(DE3)表达感受态细胞中,进行表达条件的优化以及表达产物的纯化...

晋中地区鸡致病性大肠杆菌分离株的鉴定及其16S rDNA序列的同源性分析

作者：尹姣姣; 何敏; 翟晶晶; 韩丽娟; 牛露露; 牛宏泽; 程倩倩; 车雨彤; 尹梦颖; 张鼎; 宁官保; 田文霞 刊期：2019年第03期

为了鉴定晋中地区鸡致病性大肠杆菌,利用传统细菌鉴定方法及16S rDNA序列分析,对分离自晋中地区养殖场送检的30只病死鸡肝中的疑似大肠杆菌菌株进行鉴定及遗传进化分析。结果表明:分离出8株致病性不同的大肠杆菌;鉴定出O78、O2、O11共3种血清型;8株菌均为多药耐药菌,其中对5种及5种以上抗菌药物耐药的菌株达到总分离菌株的87.5%;将8株菌株的16S ...

猪流行性腹泻病毒检测方法的研究进展

作者：李亚兰; 袁晓民; 湛洋; 杨凌宸; 胡意; 谭磊; 刘谭彬; 郭时印; 王爱兵 刊期：2019年第03期

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性传染病。该疫病的爆发流行,给养猪业造成巨大的经济损失。因此,灵敏、快速检测诊断PEDV感染是实施病毒防控措施的关键环节。本文对于近年来检测PEDV的实验室方法进行了总结,包括病毒分离培养鉴定、病毒电镜形态检查...

泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：邓盈盈; 谢晶莹; 韩玉梅; 张海霞; 李向茸; 李琼毅; 魏锁成; 冯若飞 刊期：2019年第03期

为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法的线性关系好,以质粒标准品构建的标准曲线的相关系数...

不同部位贯众黄酮的响应曲面法优化微波提取和体外抗氧化及细胞增殖试验的研究

作者：任喆; 龙瑶; 詹玉琳; 陈仕雄; 张浚文; 孙梦珂; 唐明源; 高乐; 秦韬 刊期：2019年第03期

本试验旨在研究响应曲面法制备贯众黄酮的最佳提取工艺条件。在单因素试验的基础上,采用响应曲面法考察乙醇体积、料液比以及微波处理时间对贯众黄酮提取率的影响,并研究提取不同部位的贯众黄酮对细胞进行增殖试验和体外抗氧化能力的测定。结果显示,黄酮的最佳提取工艺:乙醇浓度70%,料液比1∶56.04,微波处理时间10.74 min,在此条件下黄酮得率的...

利用CRISPR-dCas9系统促进脂肪干细胞的成骨诱导分化

作者：杨馥如; 王学智; 余四九 刊期：2019年第03期

为了建立一种快速促进脂肪间充质干细胞成骨诱导分化的方法,本研究利用CRISPR-dCas9系统快速激活成骨前体基因的表达,通过对细胞内前体基因转录的检测和诱导分化后茜素红染色来确定成骨诱导分化的效率。结果可见,通过CRISPR-dCas9系统可以快速地启动RUNX2和OSX基因的转录;经成骨诱导分化后茜素红染色显示,基因编辑过的细胞成骨诱导更快。本研究...