摘要：目的原核表达人细胞角蛋白20（cytokeratin 20,CK20）,并制备其单克隆抗体。方法利用CK20蛋白的cDNA扩增CK20的外显子基因,插入原核表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-ck20,转化大肠埃希菌BL21中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过间接ELISA法对杂交瘤细胞进行筛选,小鼠体内诱生腹水法批量制备单抗,并进行亚型、Western blot及免疫组化鉴定。结果重组表达质粒pET28a-ck20经双酶切及测序证明构建正确,纯化的重组CK20蛋白纯度在90%以上。制备的CK20单抗重链类型为IgG2b,轻链类型为Kappa链;能够很好地与CK20蛋白抗原产生结合反应,在1∶200稀释后能够较好地对结肠腺癌组织进行染色,且效果优于进口产品。结论利用重组表达的人CK20蛋白制备的单抗可用于检测相关组织中该蛋白的表达,为CK20的临床诊断及研究提供了有效的工具。

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