摘要：Wilson病是一种以肝损害为常见临床表现的常染色体隐性遗传铜代谢障碍性疾病,但铜蓄积导致的肝细胞损害的具体分子机制尚不明确。本研究拟采用硫酸铜模拟肝细胞铜负荷进行体外实验,选用Western印迹法测试铜负荷肝细胞内蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）及p-eIF2α蛋白质的表达;并探究特异性eIF2α磷酸化抑制剂Salubrinal对铜负荷诱导的肝细胞凋亡、胱天蛋白酶-3活性、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）mRNA转录的影响。选用流式细胞仪测试肝细胞凋亡率;比色法测试肝细胞内的胱天蛋白酶-3活性;Real-time PCR法检测肝细胞内CHOP mRNA转录水平。本研究结果显示：（1）铜负荷显示出时间依赖性地增加肝细胞内PERK及p-eIF2α蛋白质表达（P〈0.05,P〈0.01）。（2）相比较对照组,铜负荷培养肝细胞24 h明显增加了肝细胞的凋亡率（P〈0.01）,增强了肝细胞内的胱天蛋白酶-3活性,促进肝细胞内CHOP mRNA的转录,加入特异性eIF2α磷酸化抑制剂Salubrinal后可抑制上述过程。（3）相比较对照组,铜负荷促进肝细胞PERK及p-eIF2α蛋白质表达,加入特异性eIF2α磷酸化抑制剂Salubrinal后,对铜负荷诱导的肝细胞PERK蛋白质表达无影响（P〉0.05）,但可显著抑制铜负荷诱导的肝细胞p-eIF2α蛋白质表达（P〈0.01）。本研究结果提示,铜负荷可以诱发肝细胞内质网应激,铜负荷引起的肝细胞凋亡机制与激活内质网应激PERK/eIF2α信号通路密切相关,Salubrinal具有干预该信号通路作用,能够抑制铜负荷后肝细胞的凋亡。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社