首页 期刊 中国生物化学与分子生物学报 采用TEV酶法进行整合膜蛋白拓扑学分析 【正文】

采用TEV酶法进行整合膜蛋白拓扑学分析

作者:雷凯健; 饭田秀利 河南大学药学研究所; 开封475004; 日本东京学艺大学生物系; 东京184-8501
拓扑学分析   mca2蛋白   定点突变  

摘要:为了研究膜蛋白的跨膜结构,进行拓扑学分析是十分重要的.有许多分析膜蛋白拓扑结构的方法,本文采用烟草蚀斑病毒(TEV)酶特异性切割测试蛋白中跨膜片段的前段或后端所插入的tev识别序列EXXYXQ(S/G),如果TEV酶能够切割,表明该序列位于目标蛋白的细胞质外.将Tev识别序列ENLYFQG分别插入到拟南芥整合膜蛋白的的跨膜区域,然后转化进入酿酒酵母中.消解酶(zymolyase)酶破除酵母的细胞壁后,TEV酶消化球状体,最后通过Western免疫印迹法来分析结果.有关该方法的注意事项在结果中进行了讨论.

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