摘要：以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育结合后,再加入核酸外切酶Ⅰ降解未能结合的探针.接着将保护下来的探针与连接子杂交、连接和对连接产物进行定量PCR.分别建立连接产物标准品浓度与Ct值的标准曲线和凝血酶浓度与连接产物浓度的标准曲线,通过定量PCR对凝血酶进行定量.结果显示,基于适体的外切酶保护凝血酶检测方法灵敏度较高,连接产物标准品浓度的对数值和Ct值之间的方程为:y=-2.95x+33.65(R2=0.990,P＜0.01);凝血酶浓度和连接产物浓度对数值之间的方程为y=0.94x-0.29(R2=0.998,P＜0.01),还对可能影响检测的有关参数举行了探讨.

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