摘要:抗鳗弧菌独特型单克隆抗体1E10是能够模拟鳗弧菌的保护性表位,可以作为疫苗使用的一种单克隆抗体.利用基因工程抗体技术从抗鳗弧菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株1E10中克隆出抗体的重链及轻链可变区基因(VG和VL).通过定点突变技术将VH44和VL105突变为半胱氨酸并且连接到噬菌体表达载体pCANTAB5E中,突变后的VH和VL基因位于cpⅢ先导序列和cpⅢ基因之间,在LacZ启动子调控之下,以融合蛋白的形式被导入细胞间隙,依靠链间二硫键组装成二硫键稳定型Fv抗体(dsFv).加入辅助噬菌体M13K07后,dsFv以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面.ELISA测定显示:dsFv噬菌体能够与抗原结合并且这种结合呈噬菌体浓度依赖.结果表明:成功构建出了抗鳗弧菌独特型单克隆抗体dsFv基因并使其在噬菌体表面获得了正确呈现.该dsFv噬菌体有望成为新一代基因工程疫苗用于预防鱼类鳗弧菌感染.
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