首页 期刊 中国生物化学与分子生物学报 内毒素结合肽的原核表达、纯化及生物学活性鉴定 【正文】

内毒素结合肽的原核表达、纯化及生物学活性鉴定

作者:麻莉; 刘友生; 王晓东; 李永旺 第三军医大学西南医院病理学研究所重庆400038; 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所重庆400037
内毒素结合肽   原核表达   融合蛋白   纯化   活性鉴定  

摘要:重组人内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)融合蛋白在大肠杆菌中表达,分离和纯化后对其进行生物学活性观察.将构建好的Pinpoint Xa3-EBP生物素融合表达载体转化大肠杆菌DI-I5α,IPTG诱导表达菌株,亲和层析法纯化表达产物,因子Xa(factor Xa)切割分离内毒素结合肽,采用凝胶过滤和反相液相高效色谱法两步纯化,从相对分子质量、N端10个氨基酸的序列分析等方面进行鉴定;利用人单核细胞U937对重组内毒素结合肽进行了生物学活性的检测.结果发现,内毒素结合肽以包涵体形式存在,因子Xa酶切融合蛋白后得到3.5kD的内毒素结合肽,纯化后内毒素结合肽纯度达99%以上,N端10个氨基酸的分析结果与预期相符;初步证实内毒素结合肽具有较好的LPS结合活性,能够抑制LPS的作用.经原核表达及纯化复性,获得了具有较好生物学活性的内毒素结合肽,为进一步研究其功能奠定了良好的基础.

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