首页 期刊 中国生物化学与分子生物学报 聚乙烯亚胺转基因影响因素的测定及其优化 【正文】

聚乙烯亚胺转基因影响因素的测定及其优化

作者:李经忠; 王青青; 余海; 沈芬平; 吴萍萍 浙江大学免疫学研究所,杭州310031
聚乙烯亚胺   转基因   基因治疗   基因释放载体  

摘要:聚乙烯亚胺(PEI)为阳离子多聚物,可浓缩.DNA形成纳米级颗粒,作为基因释放载体转染真核细胞.选用M,25000,分枝状的聚乙烯亚胺转染质粒,比较多种转基因效率的影响因素.通过MTT法测定PEI对COS-7细胞的细胞毒性.利用电泳阻滞实验测定PEI与DNA形成复合物时所需的比例.通过PEI转染增强型绿色荧光蛋白的pEGFP质粒、编码β-半乳糖苷酶的pSVβ质粒,探索氯喹、白蛋白、血清、盐离子浓度、质粒剂量、细胞数量等对聚乙烯亚胺转基因效率的影响.实验发现,PEI对细胞的毒性作用与剂量相关.PEI/DNA的N/P比在3.0以上方可完全结合DNA.溶酶体抑制制氯喹可增加转染效率.培养液中的白蛋白、血清会降低转染效率.生理盐溶液作为配制PEI/DNA复合物的溶媒,转染效率高于5%葡萄糖作为溶媒.随着转染质粒剂量的增加,转染效率呈剂量依赖正效应.聚乙烯亚胺是有效的体外真核细胞转染剂,可用于合成更复杂的基因释放载体.

注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社

学术咨询 免费咨询 杂志订阅