摘要:MES 23.5细胞作为研究神经变性疾病的工具,是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系,由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤-胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成,其酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的动物种属来源不清楚,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从MES 23.5细胞系中克隆了编码TH的cDNA;结构分析表明,其cDNA编码区由1497碱基构成,共编码498个氨基酸,与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为93%和100%.该杂交瘤细胞系表达小鼠TH.将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recomlfinant mouse tyrosine hydroxylase,rmTH),改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法,活性分析证明,纯化的rmTH能催化L-酪氨酸发生加单氧反应生成L-3,4-二羟基苯丙氨酸(L-多巴),rmTH的表观分子量为56kD;其酶促加单氧反应的最适pH值为7.0.乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性,而亚铁离子能明显增强其活性。
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