首页 期刊 中国生物工程 乙肝病毒X与Tab1蛋白相互作用的体内外验证 【正文】

乙肝病毒X与Tab1蛋白相互作用的体内外验证

作者:于丽丽; 胡博; 李雪; 朱乃硕 复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室微生物与分子免疫学实验室; 上海200438
hbv   x蛋白   tab1   免疫共沉淀实验   gst沉降实验  

摘要:目的:借助实验室前期质谱分析技术和数据分析研究基础,采用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白质沉降实验(GST pull-down)验证HBV X蛋白与Tab1蛋白的相互作用,为进一步研究HBx在HBV慢性感染致癌机制中的作用提供一定的实验依据。方法:成功构建pGEX-2TK-GST-HBx质粒,对GST-HBx融合蛋白进行诱导表达,与GST-beads结合孵育,构建pcDNA3.1/myc-His(-)BTab1,转染293T细胞使其表达,然后GST pull-down体外试验验证二者的相互作用;构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1和pcDNA3.1-3×flag-HBx真核表达质粒,共转染293T和HepG2细胞使其表达,通过Co-IP实验验证抗Myc抗体可以将HBx从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在两种细胞系中存在相互作用。结果:显示了HBx和Tab1在体内外条件下能够发生相互作用,为进一步明确HBV X蛋白功能及作用机制奠定基础。

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