摘要：目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件.方法:将克隆到的人类OPG基因5'端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β-半乳糖苷酶的LacZ基因作为报告基因,构建表达载体pCI-Neo-OPG-LacZ.经显微操作注射到受精卵原核中,经PCR以及Southern印迹杂交鉴定转基因阳性小鼠;用RT-PCR分析LacZ在组织中的表达;利用邻硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)作为底物反应后比色分析组织中的β-半乳糖苷酶活性.结果:构建完成的表达载体pCI-Neo-OPG-LacZ质粒经酶切和测序鉴定序列正确,线性化后显微注射.PCR以及Southern印迹杂交鉴定获得了10只转基因小鼠(Founders),经交配繁育,建立了5个转基因小鼠系,RT-PCR分析表明其中一个系小鼠组织中表达LacZ基因,与内源OPG表达模式一致,组织中可以广泛检测到相应的β-半乳糖苷酶活性.结论:成功建立了人类OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠,为体内研究OPG转录水平的表达及药物筛选提供了理想的动物模型.

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