摘要：目的单甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰大肠杆菌重组L-门冬酰胺酶(L-ASP),考察经过修饰的酶的稳定性.方法N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化酯法活化mPEG,生成的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰琥珀酸亚胺酯(SSmPEG)按不同摩尔比例与L-ASP偶联,确定适合的反应时间和反应pH值.通过聚乙二醇化学修饰后的酶(L-ASP-PEG),酶活力和纯度通过奈氏法和丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,高效液相色谱检测L-ASP-PEG相对分子质量并考察了L-ASP-PEG体外稳定性等.结果SDS-PAGE显示mPEG已经偶联到L-ASP分子上,以两者摩尔比10:1为最佳,反应pH条件为8.5,获得的L-ASP-PEG平均比活单位为64.8IU/mg,相对分子质量为301 800,体外稳定性高于L-ASP.结论此实验确定了mPEG化学修饰L-ASP最佳反应条件为25℃反应30 min,两者投料摩尔比为10:1,获得的L-ASP-PEG比L-ASP稳定性高.

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