首页 期刊 中国皮肤性病学 靶向角蛋白17基因的小干涉RNA对角质形成细胞增生与凋亡的影响 【正文】

靶向角蛋白17基因的小干涉RNA对角质形成细胞增生与凋亡的影响

作者:王岩; 王刚; 刘玉峰; 孙林潮; 沈柱 第四军医大学西京医院皮肤科; 陕西西安710032
角蛋白17   角质形成细胞   rna   干涉   银屑病  

摘要:目的 利用RNA干涉技术诱导角蛋白17(K17)基因沉默,观察其对角质形成细胞(KC)增生和凋亡等生物学活性的影响。方法合成两条含有针对人K17mRNA序列的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体psilencer3.1-H,neo相连接,经鉴定后转染人角质形成细胞系HaCaT,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞K17mRNA与蛋白水平的改变,用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期及凋亡情况,并通过透射电镜观察细胞的凋亡。结果成功构建了靶向人K17基因的siRNA表达载体psilencer3.1/K17,检测到瞬时转染的HaCaT细胞中K17的蛋白水平及mRNA水平均明显下降。流式细胞仪检测表明转染细胞的细胞周期发生了明显的G1期阻滞并证实凋亡的存在,电镜下观察到凋亡小体。结论对于增生活跃的角质形成细胞,K17的表达对其增生、分化和凋亡等生物学活性具有重要影响。靶向K17的siRNA能够抑制角质形成细胞增生。诱导其凋亡。

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