摘要：以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）168-Tres基因组为模板,PCR扩增得到同源臂基因sle B1和cwl J1,重叠PCR连接sle B1与卡那霉素抗性（kmr）基因,电转获得B.subtilis 168-TresΔsle B菌株;连接cwl J1与博来霉素抗性（zeor）基因,电转获得B.subtilis 168-TresΔsle BΔcwl J菌株。结果表明,经kmr、zeor抗性筛选及PCR鉴定,成功获得sle B、cwl J基因双缺失菌株B.subtilis 168-TresΔsle BΔcwl J;发酵结果显示,B.subtilis 168-TresΔsle BΔcwl J与出发菌株的芽孢形成率一致,约为88%;在LB固体培养基和麦芽糖转化生成海藻糖体系中B.subtilis168-Tres的芽孢萌发数为4.8×108 CFU/m L,B.subtilis 168-TresΔsle BΔcwl J芽孢未萌发;在麦芽糖转化生成海藻糖体系中,重组菌海藻糖合酶酶活为10.42 U,比原始菌提高了78.7%。敲除sle B、cwl J基因后,不影响枯草芽孢杆菌生成芽孢的量,但能有效控制芽孢在上述转化体系中的萌发,使芽孢表面稳定展示海藻糖合酶,提高了芽孢的利用率。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社