摘要：【目的】转录因子Oct4、Nanog是调节干细胞多能性相关的转录因子，在干细胞的分化和胚胎发育中有重要作用。本研究旨在克隆水牛Oct4和Nanog基因、分析基因序列和蛋白结构、构建逆转录表达载体，并在水牛体细胞中表达，为进一步研究其在水牛早期胚胎发育中的作用，以及为建立水牛胚胎干细胞系和诱导多能干细胞系（iPSC）奠定基础。【方法】分别从水牛生殖嵴和体细胞中提取RNA和DNA，将RNA反转录成第1链cDNA，参照牛基因序列（Oct4：NM一174580，Nanog：NM一001025344）设计特异性弓I物，采用RT—PCR和PCR分别扩增Oct4和Nanog的编码区序列（thecodingsequences，CDS）和DNA全长序列，其中Oct4全长DNA分3段扩增，Nanog全长DNA分2段扩增；利用生物在线分析软件对水牛Oct4和Nanog进行蛋白质结构预测和同源性比对；采用血球I、XholI和XholI、NotI双酶切，T4连接酶，将Oct4和Nanog的CDS连接到逆转录病毒载体pMX上，构建逆转录表达载体pMX—Oct4和pMX-Nanog；采用组织块法培养水牛胎儿成纤维细胞（buffalofetalfibroblasts，BFFs），逆转录表达系统经过病毒包装后产生的病毒上清液感染BFFs，感染12—15h后，继续培养48h；通过RT—PCR和免疫荧光技术检测转基因在BFFs中的表达情况。【结果】Oct4CI）S全长i083bp，编码361个氨基酸，DNA全长4509bp，包括5个外显子和4个内含子；NanogCDS全长903bp，编码301个氨基酸，DNA全长4473bp，包括4个外显子和3个内含子；将Oct4和Nanog基因序列提交到GenBank，分配的基因登录号分别为JN991003和JN991004；Oct4氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为98％、96％、91％和81％，Nanog氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸的同源性分别为90％、81％、69％和47％；Oct4和Nanog蛋白结构与小鼠相应蛋白的结构相似，分别含有本家族特有的POU结构域和HOX同源结构域�

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