首页 期刊 中国国境卫生检疫 结核杆菌HSP65与IL—12多价DNA疫苗的构建 【正文】

结核杆菌HSP65与IL—12多价DNA疫苗的构建

作者:朱振华 王双桂 潘永杰 象山出入境检验检疫局 象山315700 象山县中医院检验科 象山315700
杆菌   结核   hsp65   共表达  

摘要:[目的]构建结核杆菌H37RV株HSP65基因与IL-12基因的共表达载体pVIVO2-HSP65-IL-12,并研究其在Vero—E6细胞内表达的可行性,为新一代结核多价DNA疫苗寻找理论依据。[方法]采用PCR技术,从培养的结核杆菌H37RV中抽提HSP65基因,克隆到pVIVO2-MCS上的一个多克隆位点,构建pVIVO2-HSP65,将质粒pORF—IL-12上的IL-12基因经双酶切后,亚克隆到pVIVO2-HSP65上,构建成共表达载体pVIVO2-HSP65-IL-12。并经XbaⅠ/AvrⅡ和NcoⅠ/NheⅠ进行双酶切和测序鉴定;用间接免疫荧光法(IFA)检测HSP65和mIL-12基因在Vero—E6细胞中的表达。[结果]双酶切和测序分析证明HSP65基因和mIL-12基因成功克隆到pVIVO2-MCS上,且方向正确,序列无突变;间接免疫荧光试验结果为阳性。[结论]共表达载体pVIVO2-HSP65-IL-12构建成功,且pVIVO2-HSP65-IL-12可在Vero—E6细胞中获得共表达。

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