首页 期刊 中国国境卫生检疫 实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌重组质粒标准的构建 【正文】

实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌重组质粒标准的构建

作者:田绿波 左浩江 陈肖潇 周倩 樊学军 吴志云 裴晓方 四川国际旅行卫生保健中心 成都610041 四川大学公共卫生学院医学检验教研室 成都610041
杆菌   蜡样芽胞   taqmantm探针   重组质粒   实时荧光定量pcr  

摘要:[目的]构建蜡样芽胞杆菌16s-23s ITS重组质粒,为实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌提供质粒标准。[方法]选择蜡样芽胞杆菌16s-23s ITS特异基因作为目的靶序列,设计、合成引物和探针,采用普通PCR扩增特异靶序列,克隆到pGM—T载体后,转化感受态大肠埃希菌DH5α,经蓝白斑筛选,再分别用EcoRI酶切,普通PCR及测序3种方法证实目的片段已成功重组。建立荧光定量PCR检测蜡样芽胞杆菌的标准曲线。[结果]成功构建目的重组质粒,并以此为标准制作荧光定量PCR标准曲线,重组质粒标准具有较大的线性范围(10^2copies/ul~10^8 copies/ul)和灵敏度。[结论]该方法构建的16s-23s ITS基因重组质粒能满足实时荧光定量测定对参考标准的要求,为后续实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的推广应用提供了条件。

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