摘要：目的探索并优化肺炎链球菌荚膜教学标本片的制作条件和染色过程,以期找到适合我校荚膜教学标本片需求的制作和保存方法,提升微生物实验课堂的教学质量。方法将肺炎链球菌传代活化后制成悬液,以腹腔注射法(0.2 ml悬液)感染10只昆明小鼠并传代培养,提取发病待濒死小鼠的腹腔液涂片,分别使用石炭酸复红染色法和改良Hiss荚膜染色法对其进行染色,从菌体形态、数量、荚膜大小、染色效果等方面综合比较两种染色方法的差异。最后将镜检合格的标本用中性树胶封固,贴上标签后保存备用。于2018年12月,抽查我校2017年12月使用改良Hiss荚膜染色法所染制的35片标本片,评估标本片的质量。结果随着传代的进行,受染小鼠体内的肺炎链球菌增多,荚膜增大。传代两次即可见宽大的荚膜,且第二次传代感染实验小鼠的发病时间明显缩短,两次感染发病时间分别为10~12 h和8~10 h。同传统的石炭酸复红染色法比较,改良Hiss荚膜染色法所染制的标本,背景均匀,染料颗粒少,菌体呈现深紫色,同淡紫色背景对比明显。同时,抽查已保存1年的改良Hiss荚膜染色法所染制的标本共35片,抽查结果表明,改良Hiss荚膜染色法制作、保存的标本荚膜仍清晰可见,无褪色和霉变现象,标本片完好率达到100%。结论在实际教学中,小鼠体内传代两次即可观察到明显的荚膜,改良Hiss荚膜染色法的染色效果优于传统的石炭酸复红染色法,且封片保存的标本可反复多次使用,能满足我校教学需要。

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