摘要:目的研究shRNA抑制人胃癌细胞株AGS中自分泌运动因子Autotaxin表达对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法通过基因序列设计合成特异性ATX—shRNA及随机阴性对照mock—shRNA,构建相应的表达质粒pSUPER—ATX及pSUPER—mock,在阳离子脂质体的介导下将此表达质粒及空载质粒pSUPER—control转染至人胃癌细胞株AGS。于转染后24、48、72h收集细胞,用RT—PCR和Western blot法检测转染后各组细胞及野型AGS细胞的内源性ATX mRNA和蛋白的表达;体外实验(MTT法、transwell法及matrigel法)测定肿瘤细胞增殖、体外迁移及侵袭能力。结果shRNA表达载体pSUPER—ATX经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。转染pSUPER—ATX后的胃癌细胞ATX mRNA和蛋白较其他组表达明显降低(P〈0.01),其增殖、体外迁移及侵袭力也明显降低。结论shRNA能有效持续抑制人胃癌细胞株AGS的ATX基因与蛋白的表达,并降低癌细胞的迁移及侵袭力。
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