摘要:目的研究荷载管家基因GAPDH shRNA的溶瘤腺病毒(TD-GAPDH)对人。肾癌细胞OSRC增殖抑制的作用。方法病毒TD—GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞、人肾小管上皮细胞HK-2。Western blot法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Western blot法分别检测GAPDH的mRNA、蛋白的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;结晶紫染色法检测细胞毒作用。结果TD—GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染的OSRC细胞均表达E1A,HK-2细胞均不表达;抑制OSRC细胞GAPDH表达作用依次为TD—GAPDH〉TD55〉ZD55-EGFP。TD—GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞的凋亡率(%)依次为(48.0±3.17)、(32.3±6.68)、(23.6±5.43),各组之间差异均有统计学意义(P〈0.05);用10MOITD—GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞,4天后存活率(%)依次为:(26.1±2.98)、(47.2±3.10)、(61.2±2.52)、PBS(100),各组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05);病毒对OSRC细胞的毒性作用依次为TD—GAPDH〉TD55〉ZD55-EGFP。结论TD—GAPDH能在肾癌OSRC细胞复制,具有显著的抑制肾癌OSRC细胞GAPDH基因表达、诱导凋亡、杀伤肾癌细胞作用。为溶瘤腺病毒进一步荷载癌基因的shRNA奠定基础。
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