首页 期刊 徐州医科大学学报 大鼠FasL基因克隆及重组慢病毒载体pLO134-FasL的构建 【正文】

大鼠FasL基因克隆及重组慢病毒载体pLO134-FasL的构建

作者:李望; 孙晓青; 张成静; 胡书群; 裴东生 徐州医学院附属医院泌尿外科; 江苏; 徐州; 221002; 徐州医学院生物化学和分子生物学研究中心; 江苏; 徐州; 221002
fasl   基因克隆   序列分析   慢病毒载体  

摘要:目的克隆大鼠FasL基因全长序列,构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL,为进一步研究FasL蛋白生物学功能奠定基础.方法根据大鼠FasL cDNA序列设计合成上、下游引物,以大鼠脾细胞提取的总RNA为模板,行RT-PCR扩增.扩增片断经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,插入慢病毒载体pLO134中并转化感受态细胞JM101.扩增后酶切鉴定,对正确的阳性克隆行DNA全序列分析.结果 RT-PCR扩增获得870 bp DN段,DNA序列分析结果与发表于GenBank上的序列(U03470)完全一致.结论成功克隆大鼠FasL基因并构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL.

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