摘要:目的: 构建pcDNA3.1-β-Trcp真核表达质粒及鉴定,检测上调β-Trcp对胃癌细胞AGS的β-catenin表达量和亚细胞定位的影响。方法: 应用PCR方法钓取β-Trcp片段与pcDNA3.1载体连接,鉴定重组质粒pcDNA3.1-β-Trcp。在胃癌细胞AGS中分别转染pcDNA3.1和pcDNA3.1-β-Trcp,利用Real-time PCR和Western blot方法检测β-Trcp表达情况,免疫荧光检测胃癌细胞ACS中,β-catenin表达量和亚细胞定位的变化。结果: pcDNA3.1-β-Trcp重组质粒构建成功,并在胃癌细胞AGS中成功表达。转染pcDNA3.1-β-Trcp质粒的胃癌细胞AGS中β-catenin整体表达量下调,在细胞核内的表达量下调尤为明显。结论: pcDNA3.1-β-Trcp质粒为进一步研究β-Trcp在胃癌中的作用提供实验基础。β-Trcp抑制胃癌细胞AGS的β-catenin表达,核内抑制尤为明显。
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