摘要：旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织（Brown adipose tissue,BAT）为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体（Melanocortin-4-receptor,MC4R）为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠（SDS）含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6（P〈0.01）和8.6的转膜电压及功率（P〈0.001）;MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液（20%Methanol＋1%Triton＋1%SDS＋RIPA）的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组（P〈0.05）,极显著优于Trizol的蛋白处理组（P〈0.01）。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂（Triton和SDS）,可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。

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