首页 期刊 新疆农业科学 小麦叶片cDNA—AFLP扩增反应体系的优化 【正文】

小麦叶片cDNA—AFLP扩增反应体系的优化

作者:李剑峰 张跃强 樊哲儒 王岩军 王浩 曲延英 范玲 新疆农业科学院核技术生物技术研究所 乌鲁木齐830091 新疆农业大学农学院 乌鲁木齐830052
小麦叶片   预扩增   选择性扩增   体系优化  

摘要:【目的】建立并优化小麦叶片cDNA—AFLP扩增反应体系,进行cDNA—AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA—AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg^2+及TaqDNA聚合酶的用量。【结果】PCR预扩增20止反应体系中,引物(40mM)1.0μL、dNTP(2.5mM)1.8μL、Mg^2+(25mM)2.2μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20μL反应体系中,引物(40mM)0.6μL、dNTP(2.5mM)2.0μL、Mg^2+(25mM)1.6μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcript derived fragments)。【结论】试验通过对引物、dNTP、Mg^2+、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA—AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础。

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